(1)固体载体的选择：许多物质都可以作为固体载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙烯酰胺、纤维素等。其形式可以是凹平板、试管、珠子等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。无论哪种载体，使用前都可以进行筛选：用等量的抗原包被，在相同的实验条件下反应，观察显色反应是否均相，判断其吸附性能好不好。

(2)包被抗体(或抗原)的选择：抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时，要求纯度好，PH值一般在9.0-9.6之间。吸附温度、时间和蛋白量也有一定影响，一般418 ~ 24小时。用不同浓度的蛋白质(0.1、1.0和10g/ml等)包被后，应滴定很适浓度。)，在其他试验条件相同的情况下，观察阳性样品的OD值。选择OD值大，蛋白量zui小的浓度。对于大多数蛋白质来说，通常是1 ~ 10微克/毫升。

(3)酶标抗体工作浓度的选择：首先用直接ELISA试剂盒法滴定初始滴度(见酶标抗体部分)。然后固定其他条件或采用“方阵法”(包被、待测样品对照品和酶标抗体分别有不同的稀释度)在正式实验体系中准确滴定其工作浓度。

(4)酶底物和供氢体的选择：供氢体的选择要求廉价、安全、显色反应明显，但无色。一些供氢体(如OPD等。)有潜在的致癌作用，要注意防护。如果条件允许，应使用非致癌、高灵敏度的供氢体。例如，TMB和ABTS目前是令人满意的氢捐助国。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱来终止反应。