双抗体夹心法是试剂盒中检测抗原的常用方法：
1.将特异性抗体与固体载体连接形成固体抗体：洗涤除去未结合的抗体和杂质。
2.加入被检标本：使其与固相抗体接触反应一段时间，使标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物。去除其他未结合的物质。
第三步，加入酶标抗体：将固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。完全清洗未结合的酶标抗体。此时，固体载体上酶的量与样品中检测物质的量正相关。
4.添加底物：夹心化合物中的酶催化底物成为有色产物。根据显色反应的程度，可以定性或定量测定抗原。
在临床检测中，该方法适用于检测蛋白质等各种大分子抗原，如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要获得针对被测抗原的外源抗体，就可以用来包被固相载体，制备酶偶联物，建立这种方法。例如，抗体的来源是抗血清，用于包被和酶标记的抗体取自不同物种的动物。例如，在使用单克隆抗体时，一般选择针对抗原上不同决定簇的两种单克隆抗体，分别用于包被固相载体和制备酶偶联物。这种双位点夹心法具有较高的特异性，通过将被测标本与酶标抗体一起保温，可用于一步检测。
双抗体夹心法检测抗原的另一个注意点是类风湿因子(RF)的干扰。RF是一种自身抗体，主要为IgM型，可与各种动物IgG的Fc片段结合。如果用于双抗体夹心检测的血清样本中含有RF，可作为抗原成分，同时与固相抗体和酶标抗体结合，出现假阳性反应。f(ab’)或Fab片段用作酶结合物的试剂，由于去除了Fc片段，可以消除RF干扰。
