3M菌落总数测试片

　　1.操作方法

　　①没有开封的时候，放在≤8℃冷藏，注意外包装上的保质期。打开包装时，应在室温下。如果已经打开，用压条或胶带密封，放在室温下，一个月内用完。

　　②将样品放入无菌均质袋或均质杯中，加入无菌稀释剂搅拌或均质样品，用稀盐酸或稀氢氧化钠调节pH至6.5~7.2。

　　注：含有柠檬酸盐、酸性亚硫酸盐或硫代硫酸盐的缓冲液不能用于无菌稀释液，这会抑制细菌的生长。

　　③将测试片放在平坦的表面，保持水平，揭开上层膜，将1毫升样液垂直滴入移液器或滴管中心。然后慢慢把上层膜掉下来，尽量不要有气泡，不要把上层膜往下滚。

　　④将压板的圆形内凹面朝下，放在上膜中央，然后轻轻按压，使样液均匀覆盖在圆形培养基面积上，切勿扭转压板。

　　⑤拿起压板，静置1分钟以上，等待培养基凝固。然后测试片的透明面朝上，*可以叠放20片，放置在36℃，培养48小时，保持培养箱的湿度。

　　2.判读方法

　　①无论大小和颜色深浅，菌落总数测试片中都含有一种红色指示染剂，能使菌落呈红色，便于计数，计算出所有的红色菌落。

　　②在25~250范围内，3M检测片菌落计数合适。

　　③测试片的计数面积约为20cm2。每个黄色方框的面积为1cm2。当菌落总数超过250时，可以选择其中一个或几个有代表性的小方框(1cm2)来估计菌落数。计算平均菌落数，然后乘以20得到测试片上的菌落数。

　　④如果测试片上的菌落太多而无法计数，则记录为“TNTC”。

　　⑤菌落数量较高，使整个生长区域变成粉红色，或者只是观察到生长边缘区域的单一菌落，记录为“TNTC”。

　　⑥菌落数量较高，有时菌落分布不均匀，记录为“TNTC”。

　　⑦可以看到直径较大的菌落，可以计数。但是，如果你仔细观察，你会发现计数区域分布着非常密集和微小的菌落，此时记录为“TNTC”。

　　⑧少量菌种会液化测试片上的培养基，计数区域会出现粉红色的液化区。此时，液化区域内的红点不应记录。应选择几个没有液化部分的有代表性的小方块(1cm2)，而不是液化区域内的菌落进行计数。计算平均菌落数，然后乘以20。得到结果。

　　⑨注意样品残渣颗粒的区域。有些样品含有一些红色残渣颗粒，菌落应该是红色规则的圆形，而颗粒的形状是不规则的。如果样品主要是红色颗粒(如辣椒粉)，则不应使用3M菌落总数测试片来检测此类样品的菌落总数。

　　3M大肠杆菌/大肠菌群测试片

　　1.操作方法

　　操作方法与3M菌落总数测试片基本相同，只需将1毫升样液加入中间红色圆形区域，无需压板，然后轻轻放下上膜，尽量不要产生气泡。然后你可以轻轻转动纸片，这样样液就可以均匀地分布在中间的红色圆形区域。

　　2.判读方法

　　大肠菌群在纸上呈现红色菌落，紧贴菌落有气泡，大肠杆菌在纸上呈现蓝色菌落，紧贴菌落，有气泡。这时候要注意区分只有红色或者蓝色菌落没有气泡的情况，或者气泡没有紧贴菌落，或者只有气泡没有菌落生长，不应该包括在计数范围内。此外，还应区分样品残渣和目标菌落。