一、原理

　　酵母和霉菌是3M检测片。(PctrifilmTMYeastandMold,PYM)测试片是一种预先准备好培养基的霉菌和酵母计数的卡片。培养基中有冷水可溶性凝胶作为载体，以及5-溴-4-氯-3消化氯-磷酸盐指示剂作为酵母和霉菌，以及抑制生长的四环素和氯霉素。圆形生长区分为30个1cmx1cm的方块进行计数。

　　设备和材料

　　温度培养箱(25℃~28℃)、冰箱(0℃~4℃)、均质器(旋刀式或拍击式)、移液器、PctrifilmTM测试片压板、振荡器、天平(感量0.1g),PctrifilmTM酵母和霉菌测试片，稀释剂，培养基和试剂，Butterfield's磷酸盐缓冲液，0.1%蛋白质水。

　　三、步骤

　　1.固体

　　8000r/min均质2min(或放入无菌均质袋中，用均质器拍打2min)，在225毫升稀释液(磷酸盐缓冲液或0.1%蛋白水)中加入25g样品，制成11。:10样品匀液。

　　2.液体

　　取25mL样品原液，放入装有225mL、稀释液的无菌玻璃瓶中，以30cm的幅度，在7s内震动25次，制成1:10样品匀液。

　　用10倍的梯度稀释上述匀液，根据样品的污染程度，选择2-3个合适的连续稀释度，每个稀释度接种2个测试片。

　　在平坦的试验台上放置3M试验片PYM试验片，揭开上膜，用移液器在3M试验片中间加入1ml样液，轻轻覆盖上膜，用压板平稳压下，使其均匀覆盖在试验片的圆形培养面积上，拿起压板，静置1min以上，使培养基凝固。

　　在25℃-28℃下，将测试片的透明面朝上放置在培养箱内，堆放不得超过20片，培养3d-5d。

　　3.判读

　　培养3d后观察计数。如果测试片上的细菌在5d后生长过快，出现边缘模糊的菌落，则使用3d的计数结果来估计菌落数。

　　在PYM测试片中，颜色均匀，灰白色到蓝绿色或粉红色，没有深色中间，边界上的小隆起菌被计算成酵母菌。颜色多样(棕色、米色、橙色、蓝绿色等。)、大型或小型扁平扩散菌落的中间颜色为霉菌。估计菌落数。

　　在PYM测试片中，颜色均匀，灰白色至蓝绿色或粉红色，无深色中心，边界明显的小隆起菌被计算为酵母。颜色多样(棕色、米色、橙色、蓝绿色等)。)、大型或小型扁平扩散菌落的中心颜色为霉菌。